AgNOR染色法:1、试剂制造：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2溶于双蒸水至99ml，在60使之彻底溶解，再参加纯甲酸1ml摇匀待用。乙液：硝酸银50溶解于双蒸水中至100ml，4冰箱保存。（2）AgNOR工作液取甲液10ml，乙液20ml临用前混合。2、过程：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2（3）AgNOR工作液中（25）浸染30分钟（暗处进行）（镜下调查）（4）双蒸水洗3（5）脱水,通明,封固3、成果：油镜调查，细胞核及胞质布景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。鞭毛染色法:１．试剂制造：氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克（１５％）２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）蒸馏水１００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很稠密的沉积，再持续滴加至刚刚溶解沉积成弄清液停止。再将备用的硝酸银溶液渐渐逐滴参加弄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，持续边滴加边摇摆，待弄清液呈现略有细微不散失的薄雾状停止。如雾重，则银盐沉积，不宜运用。２．染色办法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７培育１６—２０小时，备用。（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少数于一端的水滴中，歪斜玻片使培育物流至另一水滴中，两水滴天然相通，菌体从上位天然分散到下位水滴中，待枯燥后染色。（３）在枯燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲刷。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液坚持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液呈现蒸汽即可，用蒸馏水冲刷。（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。３．留意事项：（１）染液最好随用随配，寄存至次日作用则差。（２）必定要充沛洗净甲液后再加乙液，不然布景较脏。（３）防止水及培育物沾有氯化物。（４）切忌用接种环涂改培育物。（５）载玻片必定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除掉残酸，沥干，寄存于９５％乙醇中备用。（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。β－半乳糖苷酶能够催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。β－半乳糖苷酶的活性能够用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉积。X-gal能够做为安排染色剂，能够在所有表达β－半乳糖苷酶的植物和动物安排上发生色彩。应该是能够用来病毒感染安排切片染色的。CAE染色过程1、试剂制造：液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml（2）4％副品红液：取盐酸副品红EM级1g，溶于蒸馏水20ml内，再参加10m1／L的HCl5m1，稍加温以添加溶解度，过滤、贮室温下。于运用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测验，瞬间试纸应变为蓝色才合格，假如不变色，应参加更多的亚硝酸盐。液：o．1molL的MichaelisVeronal-醋酸缓冲液PH7630ml，参加新制造的副品红滴，用1moI／LHCl使PH值调至6．3。2、染色过程：二液混合，过滤，参加氟化钠17mg10ml,使之最终浓度为004molL（2）切片置于上述溶液内孵育1h30（3）流水冲刷。（4）苏木素复染。（5）空气枯燥后封固。Grimelius硝酸银反响法（嗜银反响）:1、试剂制造：硝酸银液:1%硝酸银水溶液毫升蒸馏水87毫升02M醋酸缓冲液PH5610毫升还原液:对苯二酚蒸馏水100毫升2、染色过程:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）60硝酸银液内3小时（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗（4）入45的还原液处理1分钟（5）蒸馏水洗（6）5%硫代硫酸钠处理1分钟可不做（7）水洗,脱水,通明,封固3、成果：嗜银颗粒呈棕黑色。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法首要用于神经内分泌肿瘤的确诊。HID染色法1、染色过程:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟（3）蒸馏水洗（4）Schiff液中染10分钟（5）自来水洗15分钟至细胞核赤色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）（6）蒸馏水洗18～24小时（8）爱先蓝液pH25染10～20分钟（9）蒸馏水洗（10）脱水,通明,封固2、成果:硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅呈现唾酸粘液，此法多用于确认肠化的分型。HP（硝酸银法）1、试剂制造：（1）醋酸缓冲贮备液，PH3602N醋酸缓冲液，PH3610ml蒸馏水240ml以下各液均用此液制造%硝酸银液硝酸银醋酸缓冲贮备液，PH36100ml%硝酸银液硝酸银02醋酸缓冲贮备液，PH3610ml%明胶液明胶醋酸缓冲贮备液，PH36100ml先把醋酸缓冲贮备液加温至40左右，然后倾入明胶，于37温箱内渐渐溶解，搅%对苯二酚液对苯二酚03醋酸缓冲贮备液，PH3610ml（6）明胶对苯二酚液%明胶液15ml（7）显影液明胶对苯二酚液16mlml在操作到第4步完结前5分钟充沛混合，置于56水浴箱中保温待用。2、操作办法：（1）安排脱蜡至蒸馏水（2）醋酸缓冲贮备液洗2%硝酸银液中，56，1小时（4）切片不水洗，直接放入预热的显影液中56，肉眼呈黄棕色停止。（5）倾去显影液，于56的水中浸洗2分钟（6）水洗（7）脱水，通明，封固。3、成果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。Highman甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）1、试剂制造：甲醇刚果红染液:刚果红05甲醇80ml甘油20ml碱性乙醇分解液:氢氧化钾0280%乙醇100ml2、染色过程:（1）切片脱蜡至水（2）甲醇刚果红染液染10～20分钟（3）用碱性乙醇分解液分解数秒（4）水洗（5）苏木素复染2分钟（6）水洗（7）脱水,通明,封固3、成果：淀粉样物呈桔赤色。4、类淀粉染色的运用：确认淀粉样变性及玻璃样变性的胶原安排，后者在刚果红法染色后呈淡桔色，常用于确诊甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。六胺银染色法1、试剂制造：六胺银液制造：3%六次甲基四胺水溶液ml25%硝酸银水溶液05ml摇晃，变清，再加25%四硼酸钠15~2ml加蒸馏水至30~40ml2、过程：（1）切片脱蜡至水，蒸馏水洗（2）05%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗（3）六胺银液60，1-280-90，半小时左右）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）（4）02%氯化金调色数秒（6）水速洗（7）烘干，通明，封片。3、成果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。Mallory三色法1、过程 （1）切片脱蜡至水 （2）05%酸性复红水溶液1 min （3）蒸馏水洗 （4）入下液1-2min 苯胺蓝05g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸 1g，蒸馏水100ml。 （5）蒸馏水洗 （6）95%乙醇分色 （7）脱水，通明，封片。 2、成果：胶原纤维蓝色， 红细胞桔黄色，核赤色。 Mallory 磷钨酸～苏木素染色法（PTAH） 1、试剂制造： 苏木素 01 磷钨酸20 蒸馏水100 ml 先将苏木素加热溶于 20 毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80 毫升蒸馏水。等苏木素冷却后，加 入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可运用。如急用，可参加02 2、染色过程:（1）切片脱蜡至蒸馏水。 （2）放入025%高锰酸钾水溶液5 分钟。 （3）蒸馏水洗。 （4）25%草酸漂白5 分钟。 （5）蒸馏水洗屡次。 （6）置于磷钨酸苏木素溶液12～24 小时。 （7）95%酒精快速分解，滤纸吸去剩下酒精，置60温箱中烘干。 （8）二甲苯通明，封固。 3、成果：纤维胶质，肌胶质，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝色。胶原，网状纤 维和骨基质着黄色或砖赤色。在工作中常用于调查横纹以证明肿瘤细胞是否有横纹肌分解特 Masson三色染色法、 1、试剂制造： 丽春红酸性品红液： 酸性品红03 蒸馏水99ml 冰醋酸 ml苯胺蓝液: 苯胺蓝 蒸馏水98 ml 醋酸 ml亮绿液： 亮绿 02g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 02 ml 苦味酸酒:苦味酸在95%酒精中的饱满液 20 ml,加95%酒精10 ml 2、染色过程： （1）切片脱蜡至蒸馏水 （2）苏木素染5～10 分钟 （3）盐酸酒精分解 （4）流水蓝化，蒸馏水洗苏木素可不染 分钟（6）蒸馏水洗 （7）1% 分钟（8）不必水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5 分钟 如染色作用欠安,可在冰醋酸内脱色后重染 （9）水速洗，置60温箱中烘干，二甲苯通明,封固 3、成果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素赤色。 4、留意： 此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的辨别，也为肾安排活检，调查肾小球病变的重要染色法，常用于调查缺血病变的心肌。 用于调查肾小球病变时，必定要用2um以下半薄切片。 细胞核染色后分解很重要，调查操控上色程度。而HE染色则是最常用的一种惯例染 色办法，但无法差异胶原纤维和肌肉。 粘液染色（一）PAS 染色法 与染糖元的办法相同。 （二）ABpH25染色法 1、试剂制造： 爱先蓝8GX 蒸馏水97 ml 冰醋酸 ml核固红液: 核固红 01g 硫酸铝 5g 麝香草酚 50mg 蒸馏水 97ml 2、染色过程: （1）切片脱蜡至蒸馏水。 （2）爱先蓝液染10～20 分钟 （3）蒸馏水洗 （4）核复染核固红5 分钟，水洗 （5）脱水,通明,封固。 唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。常用于确认胞浆内空泡的性质，特别是当细胞呈 甲基绿派洛宁法（改进Cook，1974）1、试剂制造： （1）2%甲基绿水溶液： 甲基绿（methyl green）1g 蒸馏水加至50ml 用三氯甲烷抽提，办法详后。 （2）5%派洛宁水溶液： 派洛宁G（pyronine G）1g 蒸馏水加至20ml （3）02M醋酸盐缓冲液（pH 48） 02M醋酸液41ml 02M醋酸钠液59ml （4）甲基绿派洛宁染液： 2%甲基绿水溶液（经抽提） 5ml 5%派洛宁水溶液 1ml 蒸馏水 12ml 02M醋酸盐缓冲液（pH 48） 18ml 甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于 成果晶紫而构成的一种化合物。由于甲基化作用，甲基绿就比甲基绿后，所引入的甲基衔接 得并不结实，简单从甲基绿中脱失。另一方面，在甲基化过程中，还有一部分结晶紫并没有 生成甲基绿，因而，也有人以为甲中，常有少数的甲基紫或结晶紫成份。可是，也有人以为 甲基紫乃是甲基绿的衰落产品，甲基绿在储存过程中，会不断发生甲基紫。因而，在制造试 剂时，有必要先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来，才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染 成绿色。抽提办法是取2%甲基绿水溶液20ml 倾入洁净分液漏斗，参加三氯甲烷20ml 充沛 摇摆混合，使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫赤色。旋动分液漏斗下部的砂塞，渐渐把 如此重复替换三氯甲烷，直到三氯甲烷无紫赤色停止，即可得到得纯的甲基绿溶液。 2、操作过程： （1）新鲜安排固定于Carnoy 小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯 通明，白腊包埋。 （2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。 （3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60 分钟。 （4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干剩余染液。 （5）用丙酮敏捷分解。 （6）转入丙酮二甲苯（1:1）稍洗。 （7）二甲苯通明2~3 （8）中性树胶封固。成果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。 3、对照办法： （1）取另一接连切片用核糖核酸酶（rihonuclease）1mg1ml 于37温箱内消化3 小时，蒸 馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。 （2）切片在10%高氯酸（prechloric acid）于4处理12~18 小时，水洗后用1%碳酸钠液中 分钟，流水冲刷5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述办法之 一处理后的切片就为阴性。 4、留意事项： （1）安排不宜用甲醛固定，应选用Garnoy 氏固定液，由于酒精和醋酸能较好地保存白。 （2）Garnoy 氏液固定标本的时刻不宜太长，超越一天则染色作用不抱负。 （3）要留意试剂的质量，特别是派洛宁，常常不同批号的染料，染色的作用不同。甲基绿 和派洛宁二者的份额要恰当。 （4）染色液的pH 应为48 左右，如pH 过低，甲基绿染色作用差；pH 偏高，则派洛宁染 色作用不良。 （5）丙酮分解时刻要很好把握，时刻不宜太长。 （6）配妥的甲基绿派洛宁染液用后放冰箱保存，约可运用数周。 染色原理：对此法的染色原理，现在了解得还不行清楚，一般可从下面两方面了解。1、电 离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在必定的条件 下，能够电离而带电荷，因而都有必定的等电点。甲基绿和派洛宁在水中电离后，都发生带 阳电荷的离子。甲基绿电离后，在五价氮处发生二个正电荷，碱性较强。派洛宁电离后仅产 生一个正电荷，碱性较甲基绿弱，在染色时二者进行竞赛，碱性较强的甲基绿就与胞核（等 电点pH38~42）进行极性吸着而结合，碱性较弱的派洛宁与胞质（等电点pH46~52）吸附 结合。2、聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA 有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA 有亲和力。 因而，思虑在绿选染DNA，而派洛宁选染RNA。运用：PNA 首要存在于胞质及核仁内，它 主导细胞的蛋白质组成。在细胞增生，胞质蛋白质组成亢进时，核仁和胞质的PNA 添加。 因而，恶性瘤细胞核仁巨大，胞质嗜碱。浆细胞和免疫母细胞胞质组成免疫球蛋白，胰腺上 皮组成胰蛋白酶。因而，这些细胞胞质有很强的嗜碱性。胞质嗜碱，是蛋白质组成增强的标 脂肪（苏旦）法1、试剂制造： 苏旦 01～02 70% 酒精 100 ml 将苏旦置于70%酒精中,加热饱满,在未冷前过滤,静置一夜。 2、染色过程： （1）冰冻切片（8～10 微米）。 （2）70%酒精固定1 分钟。 （3）放入苏旦酒精溶液中20～30 分钟。 （4）70%酒精洗去剩余的染料。 （5）水洗。 （6）苏木素复染2～5 分钟。 （7）1%盐酸酒精分解。 （8）水洗，蓝化,甘油封固。 3、成果：脂肪桔黄或赤色。一般用于确认胞浆内空泡究竟是糖原，水变性仍是脂滴。 高碘酸-六胺银-马休黄染色法PASM-M1、试剂制造： 六胺银原液： %六甲基四胺水溶液乌洛托品20 毫升，5 %硝酸银水溶液 10 毫升。 六胺银工作液：六胺银原液30 毫升，双蒸水 20 毫升，5 %硼砂四硼酸钠2 毫升。 核固红液：核固红01 %硫酸铝100毫升加热溶解，储存饱满液待用。 05克，无水酒精 98 毫升，磷酸 02 2、操作办法：（1）惯例脱蜡至水 （2）05%氧化20 分钟 （3）蒸馏水洗3 （4）浸入六胺银工作液中2小时左右恒温58 （5）蒸馏水洗3 （6）02%氯化金1-2分钟 （7）蒸馏水洗2 （8）核固红染色10-15分钟 分钟（10）放入温箱烤干，二甲苯通明，中性树胶封固 3、成果：肾小球毛细血管基膜呈黑色，布景和红细胞呈黄色，细胞 核呈赤色。 4、留意： 1、六胺银工作液现配现用，只能用一次。 钟，再用1%亚硫酸钠除铬，布景或许作用更佳。 3、马休黄首要是染红细胞。用无水酒精中脱水，黄色的布景就脱掉，可直接放入 温箱或电吹风吹干，封片。 瑞氏－姬姆萨染色办法1、试剂制造： 质料:A:瑞氏染粉08--1 克；吉姆萨染粉05 B:甘油33mlC：甲醇500ml 配法：将A 放入研钵中，参加少数B 研磨，再参加少数B 磨，再参加少数B 磨……倒出， 将未溶部分，持续参加B 磨……全溶，参加C，或中心参加C 亦可。 2、染色过程： 滴数滴入玻片盖满标本，30 秒，再参加双蒸水或PBS2-3 倍染1-3 分中，倾去染液，水洗…… 封片。 Trypanblue （台盘兰）排挤试验： 细胞悬液01ml 参加04% Trypan blue 生理盐水溶液01ml,混匀后滴在血球记数板上。存活 率=不上色细胞数细胞总数X100% TTC 办法： TTC 和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反响，生成赤色的甲月赞，用来表明细胞的生机。 制造多为2％，染色要避光，37 度条件下，它是点评脑缺血损害常用的目标。 VanGieson 1、试剂制造：饱满苦味酸水溶液（约122%） 150 ml 1%酸性品红 10 ml 两种溶液用前混合在一起。 2、染色过程： （1）切片脱蜡至蒸馏水。 （2）苏木素深染。（10～15 分钟） （3）Van Gieson 中染半分钟。 （4）蒸馏水洗。 （5）置60温箱中烘干。 （6）二甲苯通明，封固。 3、成果：胶原纤维赤色，肌纤维、胞浆、红细胞黄色。 4、主张：用稀释的Van Gieson 液进行染色，不必95%的酒精分解，成果色泽艳丽，并且着 色均匀。